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SDHCEC
SDHCEC
規(guī)格:
貨期:
編號:MZ-3117
品牌:Mingzhoubio

活化細胞
凍存細胞
熒光標記細胞

規(guī)格:
T25瓶
凍存管

產(chǎn)品名稱 SDHCEC
商品貨號 MZ-3117
中文名稱 人角膜上皮細胞
形態(tài)特征 內皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 細胞保持近梭形、橢圓形、三角形,表面有豐富的微絨毛,細胞呈鋪路石樣鑲嵌排列;細胞表達CK3、CK19、CK14、波形蛋白(Vimentin)、微絲蛋白(F-actin),微管蛋白(β-tubilin),細胞增殖細胞核抗原(PCNA),β1-integrin等
細胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM+10%FBS+10 ng/ml EGF+5 ug/ml胰島素+5 ug/ml人轉鐵蛋白+0.4 ug/ml氫化可的松+2 mM L-谷氨酰胺 或者
傳代方法 1:4~1:8傳代,2-3d換液
細胞凍存步驟 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復蘇細胞步驟 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代步驟 如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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